前列腺素類(lèi)似物（prostaglandin analogs，PGA）主要包括比馬前列素、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素，臨床上可用于治療青光眼、脫發(fā)、斑禿、炎癥后色素減退等。臨床研究發(fā)現(xiàn)，前列腺素類(lèi)似物會(huì)造成虹膜顏色加深，視神經(jīng)損傷，視力下降、失明等癥狀，甚至?xí)谠衅趯?dǎo)致胎兒畸變。

歐盟化妝品法規(guī)（EC）NO 1223/2009 附件Ⅱ（禁用物質(zhì)）和附件Ⅲ（限用物質(zhì)）中，暫未對(duì)該類(lèi)藥物在化妝品中的添加作出規(guī)定， 2021 年國(guó)家藥監(jiān)局修訂發(fā)布《已使用化妝品原料目錄》中未收錄含有前列腺素類(lèi)似物的化妝品原料，但是已經(jīng)引起相關(guān)組織機(jī)構(gòu)的重視。將含有前列腺類(lèi)似物的化妝品原料用于化妝品生產(chǎn)，違反《化妝品監(jiān)督管理?xiàng)l例》的有關(guān)規(guī)定。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局在 2021 年 9 月 13 日發(fā)布化妝品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法《化妝品中比馬前列素等 5 種組分的測(cè)定》，建立高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中比馬前列素等 5 種組分，為監(jiān)督執(zhí)法工作提供技術(shù)支持，保障消費(fèi)者的安全。

因此，本文參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)《BJH 202102  化妝品中比馬前列素等 5 種組分的測(cè)定》，建立了使用譜育科技的超高效液相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定洗面奶中 5 種比馬前列素的快速且高靈敏度的檢測(cè)方法，為其化妝品中前列腺素類(lèi)似物的測(cè)定提供參考。

實(shí)驗(yàn)部分

標(biāo)準(zhǔn)品、試劑和設(shè)備

       儀器：ULC 510 超高效液相色譜儀（具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱）、EXPEC 5210 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀。比馬前列素標(biāo)準(zhǔn)品：比馬前列素、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素，購(gòu)自天津阿爾塔公司（含量均≥98.0%）；

       樣品：洗面奶，購(gòu)自市場(chǎng)，膏乳狀；

       試劑：甲醇為 HPLC 純，購(gòu)自默克；乙腈為 HPLC 純，購(gòu)自默克；甲酸為 HPLC 純，購(gòu)自上海安譜；乙酸銨為 HPLC 純，購(gòu)自上海安譜；氯化鈉為分析純，購(gòu)自永華化學(xué)股份有限公司；水為超純水。

       前處理設(shè)備：渦旋振蕩器、高速離心機(jī)、分析天平、超聲波清洗儀。

圖 1 超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀

液相和質(zhì)譜條件

       監(jiān)測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)，硝基咪唑類(lèi)化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見(jiàn)下圖。

圖 2 目標(biāo)化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)等質(zhì)譜參數(shù)

樣品前處理

        稱(chēng)取洗面奶 0.2g（精確到 0.0001g），置于 50mL 離心管中，加入飽和氯化鈉溶液（稱(chēng)取40g 氯化鈉置于 250mL 磨口錐形瓶中加入 100mL 水超聲 15min 即得）3mL，渦旋 30s，分散均勻，準(zhǔn)確加入乙腈 10mL，渦旋 30s，超聲提取 20min，靜置至室溫，以 10000r/min 轉(zhuǎn)速離心 5min，準(zhǔn)確吸取上清液 5mL，加水定容至 10mL，混勻，經(jīng) 0.22μm 濾膜過(guò)濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)?/span>

空白基質(zhì)溶液：稱(chēng)取空白試樣 0.2g（精確到 0.0001g），置于 50mL 離心管中，自準(zhǔn)確加入飽和氯化鈉溶液 3mL 起與樣品同樣處理，作為空白基質(zhì)提取液。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

       標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取比馬前列素、拉坦前列素、曲伏前列素、他氟前列素標(biāo)準(zhǔn)品各 10mg（精確到 0.00001g），分別置于 10mL 棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，

搖勻。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的質(zhì)量濃度均為 1000mg/L，置于-18℃冰箱中避光保存。

       混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確移取比馬前列素、拉坦前列素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和曲伏前列素、他氟前列素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量，用甲醇配制得比馬前列素、拉坦前列素濃度為 10 mg/L、曲伏前列素和他氟前列素濃度為 100 mg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，置于-18℃冰箱中避光保存。

       分別精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液適量，用空白基質(zhì)溶液配制得基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，比馬前列素、拉坦前列素梯度濃度分別為 50ng/mL、25ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL 和 0.1ng/mL，曲伏前列素和他氟前列素梯度濃度分別為 500ng/mL、250ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2ng/mL 和1ng/mL。基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

線(xiàn)性

       按照 2.4 配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，依次進(jìn)樣分析，使用外標(biāo)法定量，以特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)信息如下所示。

靈敏度

       精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液適量，按 2.3 樣品處理制成不同濃度的基質(zhì)溶液，按 2.2 方法測(cè)定，以特征離子質(zhì)量色譜峰大于 3 倍信噪比（峰-峰）的濃度為檢出限，大于 10 倍信噪比（峰-峰）的濃度為定量限。本方法中 5 種比馬前列素化合物的檢出限和定量限低于國(guó)標(biāo)要求。

加標(biāo)回收率和精密度

       精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液適量，按 2.3 樣品處理制成比馬前列素和拉坦前列素濃度為 0.5 ng/mL、0.8 ng/mL、2.5 ng/mL、5 ng/mL 和 10 ng/mL 的基質(zhì)溶液；曲伏前列素和他氟前列素濃度為 5 ng/mL、8 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL 和 100 ng/mL 的基質(zhì)溶液，

按 2.2 方法進(jìn)樣測(cè)試（n=6），計(jì)算加標(biāo)回收率和精密度結(jié)果。

5 種比馬前列素類(lèi)化合物加標(biāo)濃度 0.5 ng/mL 回收率為 80.07%~104.37%，精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 5.72%~7.34%（n=6）；加標(biāo)濃度 0.8 ng/mL 回收率為 86.90%~105.12%，精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 4.55%~7.25%（n=6）；加標(biāo)濃度 2.5 ng/mL 回收率為 90.24%~108.56%，精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 3.45%~6.13%（n=6）；加標(biāo)濃度 5 ng/mL 回收率為 91.99%~105.94%，精密度相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.62%~4.81%（n=6）。

樣品測(cè)試結(jié)果

       洗面奶樣品經(jīng)過(guò) 2.2 樣品前處理后測(cè)試結(jié)果如下所示。

表 8 洗面奶樣品中 5 種比馬前列素測(cè)試結(jié)果

        洗面奶供試品中的比馬前列素、拉坦前列素、曲伏前列素和他氟前列素均未檢出。

結(jié)論

       本文使用譜育科技 EXPEC 5210 LC-MS/MS 對(duì)洗面奶供試品中比馬前列素、拉坦前列素、曲伏前列素和他氟前列素進(jìn)行分析，考察方法的線(xiàn)性、靈敏度、精密度、加標(biāo)回收率。在線(xiàn)性范圍內(nèi)，5 種比馬前列素類(lèi)化合物的線(xiàn)性系數(shù)均大于 0.999。5 種比馬前列素類(lèi)化合物檢出限低于 0.0511 mg/kg，定量限低于 0.1533 mg/kg。洗面奶供試品中的比馬前列素、拉坦前列素、曲伏前列素和他氟前列素均未檢出。本方法滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn) BJH 202102 要求，適用于化妝品中 5 種比馬前列素的測(cè)定。

附錄

EXPEC 5210 型 LC-MSMS 配置清單

• 液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀

  檢測(cè)儀器在線(xiàn)詢(xún)價(jià)